本发明公开了一种液体菌种培养双孢蘑菇的方法，属于蘑菇培养技术领域。本发明是取甘露醇、胰蛋白胨、淀粉和琼脂制得培养基，调节pH后，升温灭菌，接种双孢蘑菇孢子静置培养备用；再取麦芽汁、玉米粉、磷酸钾等物质混合，加入去离子水，高温灭菌后接种备用的双孢蘑菇菌种，静置后摇床振荡培养，然后与蒸馏水混合，加入经粉碎、淋湿发酵、加入石灰水浸泡、灭菌后的甘蔗渣调和，放入聚丙烯塑料袋中培养，经覆土、洒水，在一定温度下培养，即可。本发明的有益效果是：本发明的培养方法成本低于其他方法5%，生产周期短、污染率低，无需大量人工和场地，管理方便；培养出的双孢蘑菇品质好、产量高于其他方法7%以上，菌龄一致，有利于机械化操作，适合大规模生产